尺寸排阻色譜法（SEC）是在非變性條件下分析蛋白質(zhì)、單克隆抗體，包括：片段、單體及聚集體的公認(rèn)方法。數(shù)十年來，TSKgel SW 系列色譜柱一直是業(yè)內(nèi)生物治療藥物SEC分析的主力產(chǎn)品。TSKgel?UP-SW3000-LS 色譜柱是這一著名色譜柱系列中的新成員。

TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱分辨率高、峰形銳利，開發(fā)的方法高效、穩(wěn)健、重現(xiàn)性強(qiáng)，且易于在 UHPLC和HPLC系統(tǒng)方法間轉(zhuǎn)移。在與高級檢測器聯(lián)用時(shí)，該UHPLC色譜柱可顯著降低噪音水平、縮短平衡時(shí)間及提高數(shù)據(jù)質(zhì)量。

圖1?TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱與高級檢測器 SEC 聯(lián)用分析

圖2?TSKgel UP-SW3000-LS 的校準(zhǔn)曲線

近來，單克隆抗體衍生的雙特異性或多特異性生物分子受到越來越多的關(guān)注。由于低分子量雜質(zhì)和高分子量雜質(zhì)的增加，使這些生物分子可能變得更加復(fù)雜。因此，需要更高級的檢測方法，如：MALS或質(zhì)譜法來表征這些復(fù)雜的樣品。TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱正是為與高級檢測器聯(lián)用分析而設(shè)計(jì)的UHPLC色譜柱。針對多角度光散射（MALS）應(yīng)用時(shí)，低噪音水平意味著高信噪比和檢測靈敏度提升。針對質(zhì)譜應(yīng)用時(shí)，低柱流失可增加電噴霧離子化效率，增強(qiáng)整體MS的性能和設(shè)備正常運(yùn)行時(shí)間。 ?

TSKgel UP-SW3000-LS 如何在 MALS和MS應(yīng)用中實(shí)現(xiàn)低噪音

TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱的主要特點(diǎn)是噪音更低，如圖3A 所示。LenS3多角度光散射檢測器采集的小角度信號數(shù)據(jù)顯示該色譜柱柱流失水平非常低。

為了便于比較，將流動相進(jìn)樣到三種不同的色譜柱，TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱（圖 3A）、競品光散射專用色譜柱（圖3B）和生物制藥分析用 UHPLC 色譜柱（非Tosoh產(chǎn)品，圖3C）。結(jié)果表明，TSKgel UP-SW3000-LS色譜柱尖峰最少、噪音水平最低。

圖3 MALS應(yīng)用下HPLC和UHPLC色譜柱的比較

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圖 4 所示為質(zhì)譜應(yīng)用時(shí)柱流失情況。圖中顯示的平衡期間和進(jìn)樣流動相后的累積強(qiáng)度 代表柱流失情況。TSKgel UP?SW3000-LS柱“流失” 信號最低，結(jié)果取自20分鐘一次的平衡周期。

圖4 ESI-MS 應(yīng)用下HPLC和UHPLC色譜柱的比較

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批間重復(fù)性和柱壽命

如圖5所示，TSKgel UP-SW3000-LS色譜柱不僅能夠同時(shí)兼容MALS和MS檢測，而且批間重復(fù)性高。如表1所示，柱壽命>500次進(jìn)樣（測試期間歇性停泵）進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)。這些特點(diǎn)使該色譜柱成為復(fù)雜生物治療分子高效、可靠分析的選擇。

圖5 TSKgel UP-SW3000-LS 的批間重復(fù)性

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表1 色譜柱壽命?

上表是單根TSKgel UP-SW3000-LS色譜柱上重復(fù)進(jìn)樣抗體，進(jìn)樣100次后，停泵6小時(shí)。繼續(xù)進(jìn)樣抗體前，采用對氨基苯甲酸作為樣品來測試色譜柱柱效（洗脫時(shí)間和理論塔板數(shù)）。

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