第一百零九期采用TSKgel色譜柱分析保健食品中免疫球蛋白IgG

2018年07月31日來源：管理員

IgG是免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）的縮寫，是血清主要的抗體成分，約占血清Ig的75%。其中40～50%分布于血清中，其余分布在組織中。IgG是唯一可以通過胎盤的免疫球蛋白。IgG的功能作用主要在機體免疫中起保護作用，大多數抗菌、抗病毒；應對麻疹、甲型肝炎等，能有效地預防相應的感染性疾病。免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。

? ? ? 免疫球蛋白IgG，目前已作為功效成分添加于保健食品中，該成分對于增強免疫力、調節動物體的生理功能和某些特定物質的代謝等均有一定效果。

? ? ??食品安全國家標準GB/T 5009.194-2003中的IgG檢測法，是根據高效液相親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基連接，在pH 2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。?

? ? ?下文中采用了日本東曹公司的親和色譜柱 TSKgel Protein A-5PW，參照GB/T 5009.194-2003，對初乳素樣品中的IgG含量進行了分析。

? ? ? TSKgel Protein A-5PW 是一款親和色譜分析柱，在多孔親水性的聚合物基質填料表面鍵合了重組Protein A官能團。

表一 ?TSKgel Protein A-5PW色譜柱參數表

孔徑	100 ?nm
粒徑	20 ?μm
官能團	重組Protein ?A

? ? ? ??色譜柱：TSKgel ProteinA-5PW (4.6 mmI.D.×3.5 cm)
? ? ? ??流動相A：pH 6.5, 0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液
? ? ?? ? ???流動相B：pH 2.5, 0.05 mol/L甘氨酸鹽酸鹽緩沖液
? ? ?? ? ?? 流速：0.4 mL/min
? ? ?? ? ?? 柱溫：35 ℃
? ? ? ? ? ??進樣體積：20 μL
? ? ?? ? ?? 檢測器：UV 280 nm

表二梯度洗脫表

時間（min）	流速（ml/min）	A（%）	B（%）	梯度
0	0.4	100	0	-
4.5	0.4	100	0	6
5.5	0.4	0	100	6
15.0	0.4	0	100	6
15.5	0.4	100	0	6
22.0	0.4	100	0	6

表三采用TSKgel ProteinA-5PW 色譜柱分析初乳素中IgG樣品峰參數結果

編號	名稱	保留時間（min）	理論塔板數	分離度
2	IgG	9.08	35565	18.99

分析結果表明，IgG與前面雜質峰的分離度Rs為18.99，兩次進樣測定結果的算數平均差值與算術平值比值為0.26%，完全滿足國標中規定的檢測要求。

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